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NCI-H1975肺腺癌细胞培养指南 - 俄罗斯专享会284

发布时间:2025-02-19   信息来源:元珊惠

俄罗斯专享会284的人肺腺癌细胞NCI-H1975培养指南

NCI-H1975肺腺癌细胞培养指南 - 俄罗斯专享会284

一、细胞培养条件

细胞名称:NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性:贴壁生长

冻存条件:使用无血清冻存液

培养体系:1640培养基 + 10% FBS

传代方法:第一次建议采用1:2比例进行传代

传代情况:每2天更换培养基

备注:使用无菌离心管收集管中培养基,留作过渡培养。

二、收到细胞后的处理

细胞收到后,应立即培养至良好状态,然后灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后,用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒,随后将其放置于超净工作台内严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片保存(建议40x, 100x, 200x各一张)。前三天的照片是重要的售后依据,若未提供照片则默认其状态良好。注意在放入培养箱时,密封培养瓶的盖子应拧松。传代后,建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如细胞未达到80%的汇合度,将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中,保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。如细胞密度超过80%,请按照以下步骤进行传代:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml,放入37℃培养箱中消化1-2分钟后,利用显微镜观察细胞变化,若细胞大部分变圆并脱落,迅速取回操作台,轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞,使其完全脱落并吸出,随后将悬液转移至15ml离心管,1000RPM离心5分钟,弃去上清液,加入1-2ml完全培养基重悬。
  4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶(两个T25瓶),补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

  1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时,弃去T25培养瓶中的培养液,并用PBS清洗一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆时加入5ml完全培养基以终止消化,再轻轻吹打细胞使其脱落,随后转移至15ml离心管中并以1000RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀的细胞加入1ml的无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管。
  4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中,若需转移至液氮罐,需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c、细胞复苏

  1. 从液氮中取出细胞冻存管(佩戴防护设备),快速置于37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭外壁。
  2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀细胞重悬于5ml完全培养基中,然后接种至T25培养瓶,放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
  4. 第二天,替换为新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

个别细胞特性,如贴壁不牢,可能在运输过程中发生脱落,这是正常现象。请将所有培养液收集至离心管,并以1000RPM离心5分钟,收集上清作过渡培养(之后进行对比培养)。沉淀后加入1-2ml胰酶,轻轻吹打,消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心,弃上清,加入1-2ml完全培养基变成重悬液,然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶,放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

俄罗斯专享会284提供的售后服务包括:

  1. 细胞出现问题时,可以重发的情况包括:运输过程中的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等,需在收到后48小时内报告并提供真实的实验结果。
  2. 如出现污染,需在收到后48小时内提供相关实验结果以核实,方可重发。
  3. 若常温发货的细胞静置24小时后,或干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时内绝大多数细胞未存活(需提供真实清晰的状态照片),均可申请重发。
  4. 针对细胞活性问题,请在收到产品7天内提供真实的实验结果,采用台盼蓝染色法评定活力,核实后可重发。
  5. 照片记录:收到当天及第2、3天需拍照保存,若三天内未告知问题,则视为产品合格。

请注意,细胞出现问题时,某些情况不予重发,例如:由于客户操作不当、造成污染或使用非推荐的培养体系导致细胞状态不佳等。具体情况将按需评估。